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1. 預(yù)期用途

安瓿含有從 Epstein Barr 病毒 (EBV) 轉(zhuǎn)化的細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA (gDNA)。它們旨在用作 Prader Willi & Angelman 綜合征基因檢測的參考組。數(shù)據(jù)分析必須集中在 Prader Willi & Angelman 綜合征相關(guān)位點。該專家組由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準化專家委員會 (ECBS) 于 2009 年成立，是第一個 WHO 國際遺傳參考專家組 Prader Willi & Angelman 綜合征，NIBSC 代碼 09/1401

.NB這些材料不得用于任何其他用途。

NIBSC 09/140 Prader Willi/Angelman綜合征（標(biāo)準品）

2. 注意

該制劑不適用于人類食物鏈中的人類或動物。

每種材料都經(jīng)過 PCR 檢測，發(fā)現(xiàn) HIV1、HTLV1、HBV 和 HCV 均為陰性。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹慎，以免割傷。

3. 單元

沒有分配給這些材料的單元。

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國：英國。

使用“鹽析”方法提取 DNA 樣品，并在冷凍干燥前懸浮在含有 5 mg/ml 海藻糖作為賦形劑的 Tris/EDTA 緩沖液中。

該面板包含 6 個單獨編碼的安瓿，每個安瓿含有大約 5 μg 人類 gDNA；

07/230 Angelman 綜合征，母體缺失（I 類缺失）

07/232 Angelman 綜合征，UBE3A 點突變

07/234 Angelman 綜合征、父系單親二體或

印記中心缺陷 07/236 Prader Willi 綜合征，父系缺失（15 號染色體不平衡；19 易位）

07/238 Prader Willi 綜合征，母親單親二體

07/240 Prader Willi 綜合征，父系缺失（I 類缺失）。

該小組在一項國際合作研究中進行了測試，涉及

通過使用甲基化特異性多重連接依賴性探針擴增 (MS-MLPA)、甲基化特異性 PCR (MS-PCR)、UBE3A 序列分析、Southern 印跡、微衛(wèi)星分析、甲基化敏感 PCR、DHPLC 和甲基化特異性熔解分析。

材料 07/232 的 UBE3A 序列分析證實突變?yōu)?c.1234A>T;p.Lys412Stop（UBE3A 命名法遵循 HGVS 指南，使用 GenBank 登錄號 U84404.1 并從“ATG”起始密碼子的“A”作為核苷酸編號1 英寸符合 HGVS 指南）。在健康個體中報告了 Prader Willi & Angelman 綜合征關(guān)鍵區(qū)域甲基化水平和拷貝數(shù)變化的正常變化

并且可以在 MS-MLPA 中檢測到；合作研究中的材料報告了一些 SNRPN 和 NDN 探針的非典型信號（盡管整體解釋不受影響）。

在 MS-PCR 中，樣品中出現(xiàn)非常微弱的第二條帶07/230、07/234、07/236、07/238 和 07/240 不一定是由于次優(yōu)測定條件，而是由于細胞培養(yǎng)甲基化偽影或低水平甲基化嵌合體材料。 MS-MLPA 和 MS-PCR 的總體結(jié)果如下

5. 存儲

將所有未開封的凍干制劑安瓿存放在 -20°C 或以下。請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料。

6. 開瓶指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機可商購獲得。要打開安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進行操作。

NIBSC 09/140 Prader Willi/Angelman綜合征（標(biāo)準品）

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶。

b。在室溫下用 100 μl 復(fù)溶凍干材料無菌無核酸酶水。

C。將全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無核酸酶管中。

d。讓材料在室溫下靜置 1 小時，并在使用前用吸管充分混合。

e.使用前測量 DNA 濃度并將所需量添加到您的檢測中。

F。我們建議在重新配制且不儲存的當(dāng)天使用該材料。然而，在我們手中，重組的冷凍干燥人類基因組 DNA 材料在 +4°C 下可穩(wěn)定長達 3 個月（如瓊脂糖凝膠電泳所示）或在 -20°C 或更低溫度下穩(wěn)定更長時間。

應(yīng)注意避免交叉污染其他樣品。