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1. 預(yù)期用途

該面板包括七個單獨編碼的安瓿，每個安瓿含有從人類細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA。每個主要標(biāo)準(zhǔn)品/安瓿瓶都有不同的 JAK2 V617F 定義值，作為總 JAK2 (NM_004972.3) 的百分比。該面板旨在用作校準(zhǔn) JAK2 V617F 檢測的二級標(biāo)準(zhǔn)、分析和試劑盒的主要標(biāo)準(zhǔn)。這些材料不用作運行控制。這些材料由外部實驗室測試，通過在等位基因特異性 (AS)-QPCR、數(shù)字 PCR、基于等位基因歧視的終點 PCR（包括 AS-PCR、擴增難治性突變系統(tǒng)-PCR (ARMS- PCR）和基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間（MALDITOF）質(zhì)譜分析）和下一代測序。

該小組由世界衛(wèi)生組織 (WHO) 生物標(biāo)準(zhǔn)化專家委員會于 2016 年成立，作為 WHO 第一個基因組 JAK2 V617F 國際參考小組，NIBSC 代碼 16/1201. 這些材料不得用于任何其他用途。數(shù)據(jù)分析必須集中在 JAK2 基因座上。不得嘗試識別源材料捐助者。

2. 注意

該制劑不適用于人類或動物人類食物鏈。

對用于制備該組的細胞系進行了測試，通過 PCR 發(fā)現(xiàn)其對 HIV1、HTLV1、HBV 和 HCV 呈陰性。在小組的制備中使用了一種 Epstein Barr 病毒 (EBV) 轉(zhuǎn)化的類淋巴母細胞系。 EBV 是英國危險病原體咨詢委員會分類的第 2 類病原體。 EBV 序列可能存在于這些材料中，但 DNA 是使用蛋白質(zhì)變性和去除的方案制備的，因此可能使病毒失活。但是，不能消除活病毒存活的可能性。與所有生物來源的材料一樣，這種制劑應(yīng)被視為對健康有潛在危害。應(yīng)根據(jù)您自己實驗室的安全程序使用和丟棄它。此類安全程序應(yīng)包括戴防護手套和避免產(chǎn)生氣溶膠。打開安瓿或小瓶時應(yīng)小心謹慎，以免割傷。

3. 單元

該小組在一項涉及 29 個實驗室和 38 種測試方法的國際合作研究中進行了測試。獲得了以下 JAK2 V167F 占總 JAK2 百分比的中值；材料 15/170 的共識值低于預(yù)期（與內(nèi)部液滴數(shù)字 PCR 數(shù)據(jù)相比）。值得注意的是，在材料 15/170 的 27 種（統(tǒng)計上合適的）定量方法中，5 種方法報告的平均值為 0%，這可能是由于該方法的檢測限或低采樣頻率的降低。水平目標(biāo)。僅來自數(shù)字 PCR 方法的結(jié)果 (n = 6)，所有這些方法都報告了大于 0% 的值，顯示平均值為 0.04% JAK2 V617F (±0.01%；95% 置信區(qū)間)。與材料 15/172（0% JAK2 V617F）相比，材料 15/170 明顯對 JAK2 V617F 呈陽性。

4. 內(nèi)容

生物材料原產(chǎn)國：英國和德國。

該面板包括七個單獨編碼的安瓿，每個安瓿含有大約 5 μg 從人類細胞系中提取的凍干純化基因組 DNA。使用“鹽析”方法提取基因組 DNA，以不同的比例組合以產(chǎn)生一系列 JAK2 V617F 值占總 JAK2 的百分比，并在冷凍干燥前用 5mg/ml 海藻糖在 Tris-EDTA 緩沖液中稀釋。

5. 存儲

將所有未開封的凍干材料安瓿存放在 -20°C 或以下。

請注意：由于凍干材料固有的穩(wěn)定性，NIBSC 可能會在環(huán)境溫度下運輸這些材料。

6. 開店指南

DIN 安瓿瓶有一個“易開”顏色的壓力點，窄的安瓿桿在此與較寬的安瓿瓶主體相連。各種類型的安瓿破碎機可商購獲得。要打開安瓿，輕輕敲擊安瓿以收集底部（標(biāo)記）端的材料，并按照安瓿破碎器隨附的制造商說明進行操作。

7. 材料的使用

在重新配制之前，不應(yīng)嘗試稱量凍干材料的任何部分

a。如上文第 6 節(jié)所述打開安瓿瓶。

b。在室溫下用 100 μl 無核酸酶水復(fù)溶每種凍干材料，在 1x Tris EDTA 緩沖液（10mM Tris，1mM EDTA）中得到純化的基因組 DNA。

C。使用移液器將每個安瓿的全部內(nèi)容物轉(zhuǎn)移到無核酸酶管中。

d。讓材料在室溫下復(fù)溶 1 小時，并在使用前用移液管充分混合。

e.使用前測量DNA濃度；將所需的量添加到您的檢測中。

F。如果將標(biāo)準(zhǔn)用于測定校準(zhǔn)目的，請確定通過分析這些標(biāo)準(zhǔn)的觀察值與預(yù)期值，為您的 JAK2 V617F 測定校正系數(shù)。有關(guān)更多詳細信息，請參閱第一個 WHO 國際遺傳參考小組對 BCR-ABL1 易位定量的建議校準(zhǔn)方法

G。如果您正在校準(zhǔn)二級標(biāo)準(zhǔn)，請在測試一級標(biāo)準(zhǔn)的同時測試此基因組 DNA，并應(yīng)用相關(guān)的校正因子。有關(guān)詳細信息，請參閱第一個 WHO 國際遺傳參考小組對 BCRABL1 易位定量的建議校準(zhǔn)方法

H。強烈建議在當(dāng)天使用該材料重組，不儲存。然而，內(nèi)部分析確定重組凍干基因組 DNA 在 +4°C 下至少穩(wěn)定 4 天（或在 -20°C 下 2 個月）。應(yīng)注意避免與其他樣品交叉污染。